兔出血症病毒VP60蛋白的原核表达及检测方法初步应用

摘要

VP60是兔出血症病毒(RHDV)的主要结构蛋白,也是免疫原性蛋白,与诱导抗病毒免疫反应直接相关,因而也是检测用首选抗原.本实验在原核系统pPRoEXTMHta中表达了VP60基因,经SDS-PAGE电泳中可见表达带.Westernblot鉴定结果表明,重组蛋白可被RHD阳性血清特异性识别,具有相应的抗原性.将表达蛋白经SDS-PAGE电泳切胶纯化后免疫BALB/c小鼠,免疫血清经全病毒ELISA检测,效价可达1∶3200-1∶6400,经琼脂扩散试验检测效价为1∶16.重组蛋白纯化、复性后,作为包被抗原初步建立了间接ELISA方法,并检测了48份兔血清样品,与全病毒间接ELSIA试剂盒检测结果相同.实验结果表明,用原核系统表达的VP60蛋白,可以作为RHD新型诊断试剂的候选抗原.