内生芽孢杆菌29-12对茄子黄萎病的防治作用及机制初探(P.144)

摘要

本文对从茄子植株茎干中分离出409株内生细菌通过初筛和复筛,获得一株对大丽轮枝菌(Verticilliumdahliae)有较好抑菌效果的菌株29-12,并对该菌株进行了分子生物学(16SrRNA)的菌种鉴定,活菌的抑菌活性、防病促生效果和内生定殖能力测定以及代谢物活性物质的分离提取和性质研究.16SrRNA序列分析结果表明,菌株29-12与GenBank中已报道的Bacillussp.DF12(登录号为AY462199)以及Bacillussp.LBM(登录号为AY962472)有97﹪的序列同源性,初步认为该菌株为芽孢杆菌,有待于进一步通过形态特征和生理生化鉴定来确定其在细菌系统发育学上的具体地位.室内抑菌试验结果表明菌株29-12可以在短时间内长满平板的大部分,从而使病原真菌菌落不能长大.室外盆钵试验显示,在接入病原真菌后的2～3周调查,菌株29-12处理的防治效果可以达到80～100﹪,接入病原真菌3周后调查防治效果有所下降.在促生长试验中发现,接入29-12菌株的茄子苗相比灌浇清水的对照,株高增加了91.64﹪,鲜重增加了122.4﹪.内生定殖试验证明,29-12菌株在茄子植株体内可以定殖一周以上.为了弄清菌株29-12的拮抗机制,我们对菌株29-12的胞外发酵液进行了活性测定,发现此菌株的发酵液对病原菌也有抑制作用,生长速率法测试得知,发酵液对大丽轮枝菌菌丝生长的抑制率可达到55.14﹪.发酵液用硫酸铵盐析的沉淀物加缓冲液溶解,获得的代谢粗产物在室内抑菌试验中可以对15株植物病原真菌产生良好的抑菌效果,其中对小麦赤霉病菌(Fusariumgraminearum)的抑制率达到64.29﹪、小麦纹枯病菌(Rhizoctoniacerealis)为76.19﹪、稻瘟病菌(Piriculariaoryzae)为78.57﹪.显微观察发现,经过该菌株的代谢粗产物处理过的真菌菌丝细胞会异常膨大成球形,然后破裂,原生质外泻.在对29-12代谢粗产物的性质测定试验中发现,此活性物质可在100℃下处理20min保持活性不丧失,并在pH5～10的环境中活性稳定,对蛋白酶K、胰蛋白酶不敏感.对活性物质的分离纯化工作正在进行中.