农杆菌介导的蝴蝶兰遗传转化体系的建立

摘要

运用固体、液体培养和抗生紊筛选等方法,研究了不同培养条件对蝴蝶兰原球茎的诱导、增殖的影响和适宜的遗传转化条件.研究表明:试管苗幼叶诱导原球茎的效果最好,诱导的最佳培养基为:MS+6-BA6mg/L+NAA1mg/L+Ad10mg/L+椰子汁20﹪;原球茎增殖的最佳培养基为:MS+6-BA2mg/L+NAA1mg/L+Ad10mg/L+椰子汁20﹪;切割成薄片的原球茎液体增殖培养的最佳接种密度为1.4g/瓶,最佳继代周期为20d;卡那霉素对蝴蝶兰原球茎薄片的液体筛选适宜浓度为80mg/L;200mg/L的头孢霉素可有效抑制农杆菌的生长;用农杆菌介导法进行遗传转化,切割成片状的原球茎比未经切割的原球茎的转化效率显著提高,未切割的原球茎几乎观察不到瞬时表达;农杆菌介导的转化法时,侵染时间为6h时,Gus瞬时表达的效率最高为50﹪.