凝胶包埋培养大鼠肝细胞用于醋氨酚肝毒性的研究

摘要

建立一种能代替多孔板培养法的新原代肝细胞模型，即胶原凝胶培养法，以用于药物肝毒性研究。实验比较两种不同培养方式的肝细胞对醋氨酚（典型肝毒性药物）的敏感程度，初步评价胶原凝胶包埋培养细胞用于药物肝毒性研究的可行性。 实验方法：将分离得到的Sprague-Dawley 大鼠肝细胞接种在24孔板贴壁培养或者包埋于终浓度为1.5 g/L 的I 型胶原中进行体外培养。以四甲基偶氨唑盐(MTT)比色法测定肝细胞活率，以尿素分泌量和大鼠白蛋白合成量表征肝细胞功能。 实验结果：72h 时，单层贴壁培养细胞在2.5 mmol/L、5 mmol/L 和10 mmol/L 的醋氨酚作用下，白蛋白分泌量分别为对照组的48％、36％和28％；而凝胶包埋培养细胞在上述三个浓度的醋氨酚作用下，白蛋白分泌量分别为对照组的23％、22％和7％。尿素测定的结果与白蛋白结果趋势相同。另外，加药24h 时2.5mmol/L 醋氨酚已经使胶原凝胶包埋的细胞活率下降到了对照组的35％，而同样浓度下单层贴壁培养肝细胞活率仅下降到了对照组的88％。可见，三个指标均显示胶原凝胶包埋培养肝细胞对醋氨酚毒性的敏感性高于单层培养方式，并更接近体内药物毒性实验的结果。 结论：作为预测药物肝毒性的体外细胞模型，胶原凝胶包埋方式可能比单层贴壁法更合理，是一种值得探索的药物评价模型。