多重PCR快速检测鉴别牛布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌的研究与应用

摘要

根据牛布鲁氏菌具有种特异性的BCSP-31K基因和结核分枝杆菌复合物23S rRNA,设计并合成了两对分别扩增各自序列的引物,建立了多重PCR快速检测鉴别以上两种病原体的方法,其扩增片段分别为311bp和838bp.特异性试验结果表明,该方法对所有供试的布鲁氏菌及结核分枝杆菌都能扩增出阳性目的片段,而对照菌株则不能扩增出任何条带,敏感性试验结果表明,该方法能检测到10pg各自的DNA模板.对3批24头牛布鲁氏菌血清凝集试验阳性(10头)或阴性(14头)牛的牛奶样品用本方法进行检测,结果符合率100％.对送检来自7个不同牛场经结核变态反应为阳性牛的鼻粘液样品37份、牛奶样品2份,可疑牛的鼻粘液样品9份和阴性牛的牛奶样品8份进行结核分枝杆菌检测,结果阳性的37份鼻粘液样品和2份牛奶样品全为阳性,9份可疑牛的鼻粘液样品中有2份为阳性,8份阴性牛奶样品仍为阴性.