香菇ISSR-PCR扩增条件的优化

摘要

ISSR分子标记是在SSR标记基础上发展起来的一种新的DNA分子标记技术,具有重复性高、操作性强、多态性水平高和信息容量大的优点,被广泛用于物种品种鉴定、遗传作图、基因定位、遗传多样性、进化及分子生态学研究中.本试验以香菇(Lentinula edodes)为材料,以改进的CTAB法提取香菇菌丝总DNA,通过对ISSR条件优化分析,初步确定了香菇ISSR的最佳方案:25 μL PCR反应体系,2.5 μL 10x PCR buffer,2.0mmol/L MgCL2,2.0U Taq酶,20ng模板DNA,0.72 μmol/L引物,各200 μmol/L的dATP、dGTP、dCTP和dTTP,合适的退火温度为53.5 ℃.为用ISSR技术鉴定香菇种质资源奠定了良好的基础.