猪卵母细胞冷冻保存研究

摘要

[方法]利用屠宰场卵巢采集的卵母细胞,以台盼蓝染色、二乙酸荧光素(FDA)染色鉴定义母细胞冷冻后的存活率,以体外成熟和体外受精鉴定卵母细胞冷冻后的发育能力,研究了不同冷冻方法和不同冷冻保护剂对猪卵母细胞的冷冻效果.[结果](1)程序化法冷冻保存中,3种冷冻保护剂乙二醇(EG),二甲基亚砜(DMSO),甘油(Gly)均对猪MⅡ期卵母细胞有冷冻保护作用,极显著高于对照组(存活率33.8％,25.8％,2 3.5％vs 2.5％,P＜0.01),且以EG的效果最好,显著高于另外两组(33.8％ vs 25.8％,23.5％,P＜0.05).(2)玻璃微细管(GMP)法是猪卵母细胞超低温冷冻的较好方法,以普通的麦管(Straw)法进行的程序化冷冻为对照组,GMP管法显著提高猪卵母细胞的冷冻存活率(分别为63.3％和34.5％,P＜0.05).(3)在玻璃化冷冻方法中,不同的冷冻液载体对猪卵母细胞冷冻存活率有影响.以EFS40为冷冻液,Straw和GMP管作冷冻液载体,卵母细胞的存活率分别为45.0％和65.9％,二者差异显著(P＜0.05).(4)用Straw的程序化冷冻法和和用GMP管的玻璃化冷冻法对猪GV期卵母细胞冷冻均有效,但二者差异显著(存活率分别为30.0％和59.7％,P＜0.05).冷冻后继续培养,分别有2.8％和6.3％的卵母细胞周围颗粒层发生扩散.(5)冷冻对MII期卵母细胞的发育潜能影响较大,用新鲜精液使其受精,仅有4.9％的受精卵分裂,极显著低于对照组的49.5％(P＜0.01);发育至4-细胞期的比例为1.7％,未能发育至8-细胞期以上胚胎.