利用乙醇高效激活OPS法玻璃化冷冻牛卵母细胞的研究

摘要

本研究目的在于探讨OPS法玻璃化冷冻牛卵母细胞的高效激活方法,以验证冷冻后卵母细胞的发育能力.体外成熟培养16h和23h的卵母细胞解冻后继续培养8h和1h后进行激活对比,卵裂率分别为37.4％和41.2％,显著低于新鲜成熟24h卵母细胞(77.5％),囊胚率分别为5.9％和23.2％,但均与对照组(42.0％)有显著性差异(p 0.05);对5％～11％的不同体积浓度乙醇激活效果进行比较发现,8％和9％体积浓度乙醇与6-DMAP的联合激活效果较好,卵裂率分别为52.2％和61.1％,囊胚率分别为28.9％和30.6％,均无显著性差异(p 0.05);采用乙醇、钙离子载体A23187和离子霉素单独激活,单独激活卵裂率分别为22.8％,18.4％和27.7％,囊胚率分别为12.2％,8.5％和11.8％;或单独激活后与6-MDMAP和CHX进行联合激活处理,实验证明9％体积浓度乙醇与6-DMAP联合处理组的激活效果最好.结果表明,随着乙醇浓度的提高,激活后卵裂率和囊胚率出现先增后降的变化;9％体积浓度乙醇与6-DMAP联合激活是冷冻牛卵母细胞激活的高效方法;体外成熟培养23h卵母细胞相对于16h保存后细胞活力和体外发育能力较强,更适于冷冻保存.