大肠杆菌O157:H7 eaeA基因的基因克隆及原核表达

摘要

采用自行设计的引物、应用PCR的方法直接从广东分离株大肠杆菌O157:H7 021210的基因组中扩增出eaeA基因的完整阅读框(ORF),得到了一条大小约为2800bp的特异条带.T-A克隆后将其亚克隆至原核表达载体pET-28a(+),经PCR鉴定、酶切鉴定及核苷酸序列测定,证实成功构建原核重组表达质粒pET-eaeA,然后转化E.coli BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测.用所获得的重组融合蛋白的初步纯化产物经三次免疫新西兰兔,制得多克隆抗血清,并用琼脂扩散试验多克隆抗血清进行了证明.本试验成功的原核表达、初步纯化了pET-eaeA融合蛋白,并制得了多克隆抗血清,为下一阶段该重组蛋白生物学性质、免疫学特性研究及其应用的研究打下了坚实的基础.