猪传染性胃肠炎病毒检测基因芯片的初步构建

摘要

本研究采用PCR方法扩增制备了一批靶基因并进行了纯化,对检测芯片的靶基因点样浓度、探针浓度、杂交温度、杂交时间进行了选择,对构建TGE检测芯片的靶基因进行了筛选和TGE探针的标记试验.结果表明质粒PCR扩增和采用异丙醇沉淀纯化的靶基因质量好,检测芯片的最佳靶基因点样浓度为200ng/μl,最佳探针浓度为3000pg/μl,预杂交时间为1h,杂交时间为3-6h,杂交温度为48℃,筛选出S'、S3、sM、M、N、ORF7、POL等7靶基因构建了TGEV检测芯片,采用多重PCR扩增标记了TGEV探针,Cy3-dCTP标记浓度为2.5μmol/L,构建的TGEV检测芯片与标记的混合探针杂交效果很好.TGE检测芯片的构建成功为进一步应用和评价该技术奠定了基础.