产单核细胞李斯特菌actA基因的原核表达及其单克隆抗体的研制

摘要

本文利用PCR技术从血清型1/2a的产单核细胞李斯特菌Lm-4株中扩增出actA基因,经克隆筛选和测序鉴定后,构建成该基因的原核表达载体pGEX-6P-1-actA及pET-actA,转入终宿主菌E.coli后,IPTG诱导目的蛋白的表达.SDS-PAGE电泳结果表明,actA基因在两种载体中均获得表达,融合蛋白的大小分别约为120KD和97KD.以纯化蛋白为材料进行了ActA单抗的研制,获得四株抗ActA的单克隆抗体杂交瘤细胞株,腹水单抗ELISA效价为1:5×104～1:1×105.选取单抗1A5进行Western-blot分析,结果表明单抗1A5能和表达产物进行特异性反应,且与Lm-4多抗血清的Western-blot结果一致.actA基因的原核表达及单抗的研制为研究ActA蛋白的生物学活性及其致病作用奠定了基础,也为该菌鉴定提供了新试剂.