金黄色葡萄球菌β-溶血毒素基因的克隆与原核表达

摘要

本文应用多聚酶链式反应(PCR)技术,从本试验室保存的金黄色葡萄球菌菌种S10中提取DNA,扩增到全长982bp金黄色葡萄球菌β-溶血毒素基因(hlb),将该基因克隆到PMD-T载体,测序结果表明,该基因为不含终止密码子的目的基因.将该目的基因克隆到原核表达载体PET-32a,获得重组质粒PET-32a-β经酶切、PCR及序列测定,表明hlb基因插入的位点、大小与读码框均正确.PE-32a-β在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE电泳分析,在57kD处出现一条蛋白带,表明所克隆的hlb基因在大肠杆菌中得到良好的表达,为进一步研究hlb的生物学特性奠定了基础.