霜天蛾主要变应原的克隆、筛选及序列分析

摘要

本文对霜天蛾cDNA表达文库进行免疫学筛选,分离和鉴定霜天蛾主要变应原克隆,并测定和分析变应原序列,为制备重组霜天蛾昆虫变应原疫苗和疫苗的标准化奠定基础. 方法：构建λZAPⅡ噬菌体的霜天蛾表达文库,应用霜天蛾免疫多克隆兔血清和霜天蛾特异性过敏患者血清反复筛选霜天蛾cDNA表达文库,所得的阳性克隆经转化克隆至pBluescript质粒,PCR扩增cDNA片段,并对片段进行序列测定、分析. 结果：对5×104的噬菌体斑进行免疫学筛选,成功获得5个阳性克隆,经PCR扩增并测序分析表明,5个阳性克隆基因与Genebank中已知基因无明显同源性. 结论：本研究筛选出5个霜天蛾主要变应原的新基因,为霜天蛾过敏患者的特异性免疫治疗及进一步的实验研究奠定基础.