HBcAg和/或HBsAg基因修饰的树突状细胞诱导HBV转基因小鼠免疫应答的研究

摘要

目的：讨HBcAg和／或HBsAg重组腺病毒Ad-C和／或Ad-S转染的小鼠树突状细胞(DC)诱导HBV转基因(Tg)小鼠免疫应答的作用特点及其可能的治疗作用。rn 方法：Tg小鼠的骨髓细胞体外扩增为DC，转染Ad-C和／或Ad-S或被HBcAg或HBsAg蛋白冲击后，与pcDNA3．1(+)-C或pcDNA3．1(+)-S质粒分别免疫Tg鼠，用流式细胞术、LDH法、ELISA、荧光定量PCR法等分别检测脾脏T细胞内细胞因子和CTL活性、血清HBsAg、HBeAg、抗-HBs和抗-HBc水平、HBV DNA及ALT水平；病理切片和免疫组化分析肝脏组织学及HBsAg和HBcAg表达。rn 结果：后1-4周，DC／Ad-C比DC／HBcAg和pcDNA3．1(+)-C诱导Tc分泌IFN-γ和特异性CTL均显著增强，而DC／HBcAg组CTL较pcDNA3．1(+)-C组增强(P<0．05)；DC／Ad-S比DC／HBsAg和pcDNA3．1(+)-S诱导Tc分泌IFN-γ和特异性CTL亦均显著增强，而DC／HBsAg组CTL较pcDNA3．1(+)-S组增强(P＜0．05)；DC／Ad-C+Ad-S、DC／Ad-C、DC／Ad-S诱导Tc分泌IFN-γ和特异性CTL作用依次减弱。免疫后1-4周，对Tg鼠血清HBsAg、HBV DNA及肝组织HBcAg和HBsAg表达的抑制作用从强至弱依次为DC／Ad-C+Ad-S、DC／Ad-C、DC／Ad-S、DC／HBcAg、DC／HBsAg、pcDNA3．1(+)-C、pcDNA3．1(+)-S组。肝脏组织学和ALT水平各组无显著差异。pcDNA3．1(+)-C组可诱导出血清抗-HBc。rn 结论：d-C和／或Ad-S转染的DC比HBcAg或HBsAg冲击的DC和DNA疫苗诱导更强的Tel和CTL应答，能较迅速抑制HBV转基因小鼠血清HBsAg、HBV DNA和肝脏HBcAg和HBsAg表达，可为HBV慢性感染的治疗性疫苗提供新的有效方式，尤其是Ad-C和Ad-S共转染的DC效果最显著。