蛋白质靶上快速酶解与生物质谱鉴定技术

摘要

目前,质谱尚不能对大多数分离的蛋白质进行直接结构鉴定,通常采用蛋白质酶解方法得到特定的肽段,再通过串级质谱和碰撞诱导断裂等技术获得肽段的氨基酸序列,进而鉴定、确认蛋白质序列结构信息.因此,蛋白质的高效、快速酶解一直是研究的热点技术.胶上酶解、溶液中酶解有系统研究报道,将酶固定在特定的载体材料上,对蛋白质进行在线或离线酶解有大量研究工作.然而,靶板上的快速酶解仍然有很大优势,蛋白质经过分离后直接点到靶板上,酶解可以同时批量、规模化进行,酶解后的蛋白质/肽不会造成交叉污染,同时,靶上酶解还可以进行除盐操作,对毛细管电泳分离蛋白质样品有独特效果.本研究采用多维高效液相色谱或毛细管电泳分离数以千计的蛋白质馏分,在线点样到质谱靶板上,进而采用发展的快速靶板上酶解和除盐技术进行批量酶解,随后通过MALDITOF/TOFMS鉴定其中的蛋白质组分,获得了从数百到数千种蛋白质不等的鉴定结果。