BRD7核定位信号的结构分析和功能鉴定

摘要

目的：BRD7是我室通过cDNA代表性差异分析自主克隆的一个鼻咽癌抑瘤新基因,并已初步证实为一个潜在的核转录调节因子.本研究旨在对BRD7的核定位信号进行预测、结构分析和功能鉴定,并考察其对BRD7亚细胞定位的影响. 方法：通过生物信息学对BRD7的核定位信号进行预测和结构分析,然后利用绿色荧光蛋白(GFP)介导的直接荧光和间接免疫荧光定位方法分别对核定位信号的功能进行鉴定,并考察其对BRD7亚细胞定位的影响. 结果：BRD7的65～96位氨基酸具有潜在核定位信号(NLS)的结构特征,该核定位信号包含三簇碱性氨基酸残基,可视为由两个紧密相邻、部分重叠的双向核靶序列NLS1和NLS2组成;并发现NLS及其构成上的NLS1和NLS2均具有介导异源蛋白GFP胞核定位的功能,从而证实BRD7的65～96位氨基酸为BRD7功能性核定位信号所在区域,且单簇碱性氨基酸残基的缺失不足以破坏其核定位信号的功能;同时发现野生型BRD7呈胞核分布,而核定位信号缺失型BRD7主要呈胞浆分布. 结论：BRD7的65-96位氨基酸为BRD7功能性核定位信号所在区域,在BRD7胞核分布模式中发挥了十分重要的作用.