白喉毒素的定向突变研究及其在E.coli中的表达

摘要

本文在大肠杆菌中表达了白喉毒素(DT)全长片段。利用阴离子交换柱和分子筛进行纯化，得到了较纯的DT片段。并利用定点突变的方法，在DT的A片段的活性位点区域进行单点突变及双点突变，将纯化后的突变体蛋白用与野生型同样的方法进行纯化后，进行Vero细胞毒性实验，以期筛选到毒性小于野生型DT的蛋白，实现用基因工程脱毒的方法代替现有白喉疫苗生产中化学脱毒的方法，从而解决了原来化学脱毒工艺中时间长，存在毒力回升的可能性的两大主要缺点。