WuT3/4/8系列单抗双色及三色荧光素标记试剂的研制

摘要

目的：用FITC、R-PE、PE-Cy5分别标记小鼠抗人T淋巴细胞CD3(WuT3)、CD4(WuT4)、CD8(WuT8)系列单抗，组成单色，双色及三色荧光标记试剂，用于流式细胞术(FCM)检测分析人外周血T淋巴细胞亚群。rn 方法：将WuT3/4/8单抗用FITC标记，形成FITC-WuT3/4/8单色荧光试剂；用双功能交联试剂SPDP和SMCC分别活化R-PE和WuT3/4/8单抗后进行交联，再经Sephacryl S-300HR凝胶层析分离纯化，形成R-PE-WuT3/4/8单色标记试剂；将R-PE和Cy5混合，再用双功能交联试剂SPDP和SMCC分别活化PE-Cy5混合样品和CD单抗，用DTT使经SPDP活化后的PE-Cy5巯基化，和SMCC活化的CD单抗交联，经Sephacryl S-300柱在AKTA监测下分离纯化，制成PE-Cy5-CD单色标记试剂。将FITC-CD单抗和PE-CD单抗以一定比例混合，组成CD3/CD4，CD3/CD8双色标记试剂，将FITC-CD单抗，PE-CD单抗和Cy5-CD单抗组成CD3/CD4/CD8三色标记试剂。rn 结果: 将上述双色和三色标记试剂应用FCM检测正常人和艾滋病人外周血淋巴细胞CD3/CD4，CD3/CD8比值，应用SPSS软件对结果进行统计分析，结果显示，考核试剂(WuT CD3FITC/CD4PE，WuT CD3FITC/CD8PE)和BD公司参比试剂对500名健康成人CD3+CD4+百分比的测定结果有显著相关性(r分别为0.970和0.953，p＜0.01)；考评CD3 FITC/CD4 PE试剂HIV抗体阳性标本616人份；考评CD3 FITC/CD8 PE试剂HIV抗体阳性标本584人份，CIY3 FTTC/CD4 PE和CD3 FITC/CD8 PE两种试剂的考评结果与BD公司的参比试剂有显著相关性(r分别为0.965和0.956，p＜0.01)。rn 结论: 采用FITC、R-PE、PE-Cy5标记CD单抗的双色和三色标记荧光试剂，其抗体特异性保持完好，检测人外周血T淋巴细胞亚群比例和直方图位置正确，可用于人外周血CD3+/CD4+/CD8+T淋巴细胞亚群的检测。