人组织金属蛋白酶抑制因子-3的分离纯化及其生物学性质

摘要

目的：从人胎盘中分离、纯化组织金属蛋白酶抑制因子-3(TIMP-3)，并对其对基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的抑制作用进行评价。rn 方法：利用含4mol/L尿素Tris-HCl缓冲液(pH8.0)，从除去多数水溶性蛋白的胎盘匀浆液中提取难溶性蛋白。经CM52阳离子交换树脂和Sephacryl S-200凝胶过滤两步柱层析纯化后，用SDS-PAGE鉴定TIMP-3的纯度；用EIA和Western blot检测TIMP-3的含量；用免疫荧光测定法检测TIMP-3对MMP-1的抑制活性。rn 结果：人胎盘来源的TIMP-3由相对分子质量(Mr)为24000的非糖化蛋白和Mr27000的糖化蛋白组成。非糖基化的TIMP-3对MMP-1的IC50为1.1×10 -10mol/L，糖基化的TIMP-3为1.2×10 -10mol/L，显著高于重组的TIMP-3(IC50为8×10 -8)。rn 结论：人胎盘来源的TIMP-3由Mr为24000的非糖基化蛋白和Mr为27000的糖基化蛋白两部分组成，二者对MMP-1均具有明显的抑制作用。