人胎盘天然金属蛋白酶抑制因子3的分离纯化(英文)

摘要

背景:基质金属蛋白酶是一类可促进肿瘤生长和转移的蛋白分解酶家族,其活性可被组织金属蛋白酶抑制因子所抑制。其中组织金属蛋白酶抑制因子3的抑制作用更为重要。目的:旨在从人胎盘中完全分离纯化天然组织金属蛋白酶抑制因子3,并建立组织金属蛋白酶抑制因子3酶联免疫测定方法。设计:单一样本观察。单位:沈阳医学院中心实验室。材料:人胎盘来自沈阳医学院附属奉天医院妇产科(家属知情同意);基质金属蛋白酶1来自富士药品研究所。方法:实验于2001-03/2002-05在沈阳医学院中心实验室完成。①利用4mol/L尿素Tris缓冲液(pH8.0),制备胎盘匀浆液。②匀浆液经CM52阳离子交换树脂层析和SephacrylS-200凝胶过滤二步柱层析。③SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测相对分子量及纯度。④Westernblotting鉴定纯化蛋白的性质。⑤免疫荧光法测定组织金属蛋白酶抑制因子3对基质金属蛋白酶1的抑制率。主要观察指标:①聚丙烯酰胺电泳法所示蛋白带相对分子质量。②Westernblot的显色结果。③组织金属蛋白酶抑制因子3对基质金属蛋白酶1的抑制率。④纯化后组织金属蛋白酶抑制因子3的回收率。结果:①人胎盘分离纯化的组织金属蛋白酶抑制因子3分为非糖化和糖化两种,相对分子质量分别为24000和27000两种。②非糖化和糖化的组织金属蛋白酶抑制因子3对基质金属蛋白酶1的抑制活性分别为1.1×1010mol/L和1.2×1010mol/L。胎盘来源的组织金属蛋白酶抑制因子3对基质金属蛋白酶1的抑制活性明显高于重组的组织金属蛋白酶抑制因子3。③二步层析后组织金属蛋白酶抑制因子3的回收率为23.4%。结论:人胎盘胞外基质来源的组织金属蛋白酶抑制因子3是由非糖基化蛋白和糖基化蛋白组成;两种纯化的组织金属蛋白酶抑制因子3对基质金属蛋白酶1具有明显的抑制活性,且显著高于重组金属蛋白酶抑制因子3。