基于氧化石墨烯的毛细管电泳-固定化酶微反应器研究

摘要

本工作创新地引入了氧化石墨烯材料作为CE-酶微反应器的酶载体，利用氧化石墨烯材料合成简单、比表面积大、用于酶诱导键合相互作用的表面官能团丰富等特点，借助静电吸附层层自组装方法，制备了毛细管多层酶固定微反应器。以胰蛋白酶固定化酶反应器为例，考察了酶浓度、酶固定化时间、酶固定层数对酶反应器活性的影响。测得的固定化酶的活性和反应速度(Km:0.24+0.02mM,Vmax:0.32+0.04mM/s)与自由酶相符，表明此固定方法不会引起酶结构上的改变以及减少酶的活性。该酶反应器具有极好的稳定性(RSD%<2.8%)，且极大地提高了微反应器上酶的负载量，对BSA蛋白质的在线水解反应(孵化时间仅30分钟)与离线水解反应(孵化时间长达12小时)的质谱表征结果一致，表明该方法在蛋白质分析中具有很好的应用前景。