表达绿色荧光蛋白伪狂犬基因缺失病毒的构建

摘要

本文根据Genebank公布的质粒pGFPuv序歹U、质粒pusK序列和PRV基因gG启动子，设计一对含限制性内切酶Pst Ⅰ和Not Ⅰ酶切位点的引物，以含绿色荧光蛋白基因的质粒pGFPuv为模板，扩增了完整的GFPuv基因，然后用Pst Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后的扩增片段与经Pst Ⅰ和Not Ⅰ双酶切处理的pUSK质粒连接，转化人肠杆菌DH5a，构建了转移重组质粒puSK-pGFPuv。经酶切鉴定与PCR方法证明重组质粒大小正确，且插入了绿色荧光蛋白，并证明插入方向正确。进一步测序鉴定，测序结果表明插入的片段与预期相符。利用脂质体介导的方法，将质粒pUSK-pGFPuv和PRv基因组共转染VERO细胞进行同源重组并观察到荧光，这为筛选和进一步鉴定重组病毒打下了基础，也为构建伪狂犬gG基因缺失疫苗打下基础。