针对乙脑病毒NS5基因的shRNA抑制JEV复制的研究

摘要

利用RNAi技术抑制JEV复制,探索防控乙脑的新手段.构建了4个针对JEV NS5基因的shRNA表达质粒pS4．1-NS5-201、pS4．1-NS5-455、pS4．1-NS5-699、ps4．1-NS5-804及1个阴性对照质粒pS4．1-NS5-NC.将shRNA表达质粒分别与融合表达质粒pNS5-EGFP共转染293T细胞,通过荧光显微镜观察、流式细胞术、荧光定量RT-PCR和化学荧光Western blot检测发现,pS4．1-NS5-455、pS4．1-NS5-699和pS4．1-NS5-804均能高效抑制NS5基因的表达,其中pS4．1-NS5-699的抑制效率非常显著,以流式细胞术和定量RT-PCR方法检测的抑制效率分别高迭90．6％和94．7％.将shRNA表达质粒分别转染BHK-21细胞,感染JEV后24h,通过IFA、荧光定量RT-PCR和化学荧光法Western blot检测对JEV复制的抑制效果,实验结果与293T细胞上的结果是一致的,其中ps4．1-NS5-699在RNA转录水平和蛋白质表达水平的抑制效率分别达到了92．6％和80．5％.研究结果表明,所构建的shRNA表达质粒可以高效抑制JEV的复制.