靶向PRRSV ORF1b基因shRNA重组腺病毒体内外抑制PRRSV复制

摘要

本研究利用靶向PRRSV ORF1b的2个shRNA重组腺病毒,在MARC-145细胞上观察其抑制PRRSV S1株和SY0608株复制效果,结果表明,与表达突变shRNA的rAd-mP2以及接毒对照组相比,rAd-P2对S1株和SY0608株的复制均具有明显的抑制作用;而rAd-P3对SY0608株的抑制作用不明显。进一步观察rAd-P2在PAM细胞中抑制SY0608株复制效果,结果显示,rAd-P2可以有效抑制PRRSV细胞病变的产生,与对照相比,PRRSVN蛋白以及ORFlbmRNA水平均明显降低(p<0.05),且该抑制作用具有剂量依赖性,并随时间的延长逐渐减弱。动物试验选取了20头6周龄PRRSV阴性仔猪,分成4组,每组5头,第1和2组分别肌肉注射rAd-P2和rAd-mP2,4×109TCID50/头,24h后第1-3组肌肉注射SY0608株2×104.0TCID50/头,第4组作为正常对照;攻毒后每天测量体瘟,观察临床症状,攻毒后第1天和第5天采血,测定PRRSV含量,第9天,将所有猪只宰杀,进行肉眼病变和组织病理学观察和肺组织PRRSV real-timePCR检测。结果表明,rAd-P2可以在猪体内有效抑制PRRSV的复制,推迟动物发病3天左右,证明shRNA重组腺病毒在体内外均能有效抑制PRRSV复制,为控制PRRSV感染提供了一种可能的新策略。