猪圆环病毒2型ORF2／猪白介素2嵌合基因真核表达载体的构建、表达及在动物体内免疫效果研究

摘要

为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)核疫苗,本研究采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)将PCV2的ORF2全长基因和猪白介素2成熟肽基因(Poll-2)构建成PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因并克隆入pcDNA3．1(+)真核表达载体中;筛选阳性重组表达质粒(rpcDNA3．1／PCV2-linker-PoIL-2)转染COS-7细胞,分别采用PCV2抗原间接免疫荧光试验和PoIL-2蛋白ELISA试验方法检测COS-7细胞中表达的重组融合蛋白(rCap-linker-PoIL-2)生物学活性;提取rpcDNA3．1／PCV2-linker-PoIL-2和只含PCV2 ORF2基因的重组表达质粒pcDNA3．1／OFR2(rpcDNA3．1／OFR2)免疫Balb／c小鼠和猪并检测其免疫效果.结果表明:成功构建了PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因及其pcDNA3．1(+)重组表达质粒;rpcDNA3．1／PCV2-linker-PoIL-2在COS-7细胞浆内进行了表达,表达的rCap-linker-PoIL-2可分别与抗PCV2和抗PoIL-2蛋白抗血清发生特异性免疫反应,表明rCap-linker-PoIL-2蛋白具有Cap蛋白和PoIL-2蛋白的双重生物学活性;rpcDNA3．1／PCV2-linker-Poll一2质粒免疫小鼠后可诱导小鼠和猪体产生明显的抗PCV2抗体,且其诱导的抗体水平明显高于rpcDNA3．1／OFR2.本研究为PCV2的DNA疫苗研究奠定了基础.