PRRSV Hn-1/06株N蛋白基因高效表达及其间接ELISA方法的建立

摘要

根据GenBank中PRRSV美洲株ATCC VR2332的ORF7基因序列,利用Primer软件设计合成了针对PRRSVORF7基因的特异性引物,经RT-PCR从河南分离株Hn-1/06株扩增得到了大小为501 bp的片段,并将扩增的片段插入PGEM-T-easy载体进行测序而获得含有ORF7的阳性克隆PGEM-T-ORF7(登录号EU025136).然后将此基因亚克隆到原核表达载体PET32a,经筛选获得了阳性重组质粒PET32a-ORF7,进而在IPTG的诱导下成功表达,获得了大小约为33kD的融合蛋白N-His,Western blotting检测证实表达的融合蛋白具有良好的生物学活性.以纯化的融合蛋白为抗原建立了猪繁殖与呼吸障碍综合征N-ELISA检测方法,与国外试剂盒IDEXX-ELISA总符合率为92.5%,表明建立的N-ELISA检测方法具有很好的特异性和敏感性.