实时荧光定量PCR检测鸭乙型肝炎病毒方法的建立

摘要

根据鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus，DHBV)P基因上的保守序列设计并合成引物和荧光标记探针，建立了荧光定量聚合酶链反应(fluorsescence quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR)检测方法。本实验建立的标准曲线循环阈值（Ct值）与模板浓度具有良好的线性关系，相关系数为0.996；将其检测极限的Ct值通过标准曲线换算成拷贝数约为5copies/L，相当于5个DHBV颗粒。初步结果表明，FQ-PCR检测DHBV-DNA能直接反映DHBV感染鸭后血清和肝组织中DHBV-DNA水平，在判断体内DHBV是否复制、复制的程度以及是否被清除等方面明显优于常规PCR，为DHBV感染动物模型的建立提供了敏感和可靠的检测手段，有很好的应用前景和研究价值。将所建立的方法运用于检测拉米夫定治疗DHBV感染鸭后外周血和肝组织DHBV-DNA的含量，以评价拉米夫定治疗DHBV的效果。结果表明拉米夫定对DHBV的复制有较好的抑制效果，但停药后出现反跳现象。