人分化抑制因子Id-3基因在大肠埃希氏菌中的高效表达及其多克隆抗体的制备

摘要

从乳腺癌组织中提取总RNA，用RT-PCR扩增出Id-3的编码序列，克隆至表达载体pGEX-6P-1中，重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定证明，Id-3基因已正确克隆至pGEX-6P-1中，在大肠杆菌中经IPTG诱导表达，获得相对分子量为39000GST-Id-3融合蛋白，SDS-PAGE分析表达产物，Westernblot检测重组抗原的免疫原性。通过亲和层析法纯化表达的GST-Id-3融合蛋白，并以此为抗原制备多克隆抗体。ELISA和琼扩试验鉴定所制备的多克隆抗体可以与GST-Id-3融合蛋白发生特异性反应。Id-3基因在大肠杆菌中的成功表达及制备的多克隆抗体，为检测Id-3及其在各种组织中的表达水平提供了一种检测途径，也为分析Id-3分子结构、抗原表位和生物学功能奠定了基础。