共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白和猪瘟病毒E2蛋白的“自杀性”DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答

摘要

为了获得新型双价“自杀性”DNA疫苗，将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)GP5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)E2基因的甲病毒复制子载体疫苗pSFV1CS-E2中。为了增强免疫效果，在密码子优化的GP5基因中插入了泛DR表位（PADRE），在CSFV E2基因后融合伪狂犬病病毒(PrV)UL49基因，获得了6种重组质粒。间接免疫荧光试验显示，PRRSV GP5和CSFV E2基因在瞬时转染的293T细胞中得到同时表达。将6种重组质粒和空载体pSFV1CS分别免疫BALB/c小鼠，用间接ELISA方法检测血清抗体水平，通过基于CSFE/WST-8的淋巴细胞增殖试验和细胞因子ELISA评价疫苗诱导的细胞免疫。结果显示，除pSFV1CS组外，从各疫苗组小鼠血清中均可检测到低水平的针对GP5和E2蛋白的抗体；各疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后均能诱导特异性的淋巴细胞增殖；部分疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后可分泌较高水平的IFN-γ和IL-4；引入UL49的疫苗组细胞免疫应答显著高于其它疫苗组。这表明，这些共表达GP5和E2蛋白的自杀性DNA疫苗可以诱导体液免疫和细胞免疫，PrV UL49可以增强其细胞免疫应答。