致病性猪伪狂犬病病毒PRV-JF株的分离与鉴定

摘要

从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中，经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染，采用无PCV1污染的猪肾细胞系(PK-15)分离培养，经蚀斑克隆纯化,培育一株细胞培养适应毒，命名为PRV-JF株。分离株经细胞培养传代，能够产生典型的细胞病变，病毒滴度随代次显著增加，第24代毒价达108.5TCID50/mL。免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质内。病毒感染细胞可被已知PRV阳性血清中和。电镜负染观察到病毒粒子呈椭圆或圆形外观，无囊膜的病毒粒子直径约110nm～150nm，有囊膜的成熟病毒粒子直径约150nm～180nm。PCR鉴定该毒株含有gE基因，其序列与GenBank登录的7株PRV同源性为97.7～100%。用不同剂量病毒培养物接种家兔于24h～72h内全部死亡。研究表明，PRV-JF分离株对易感动物具有高致病性，为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫与诊断研究奠定基础。