实时定量PCR对猪圆环病毒2型感染猪体内病毒分布规律的研究

摘要

根据发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计了一对特异引物，并以克隆重组质粒作为阳性标准品，采用SYBR-GreenⅠ嵌合荧光染料建立了一种用于检测PCV2的实时定量PCR方法。该方法在107～101范围内具有良好的线性关系，相关系数R2=0.997，扩增效率E=0.920，对质粒标准品检测下限值为8.2拷贝/μL，检测变异系数低于2.0%；该方法与常规PCR及过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)，其敏感性提高103倍以上。用本法对PCV2人工感染猪心、肝、脾、肺、肾、腹股沟淋巴结等组织中病毒核酸载量检测结果表明，多种脏器均可检测到病毒，但以腹股沟淋巴结、扁桃体和脾脏中病毒含量较高，表明病毒主要在免疫器官增殖，导致淋巴细胞耗损。用实时定量PCR对来自国内不同地区的28份临床发病猪病料进行病毒DNA定量检测，有半数以上病例病毒载量持在109～10拷贝/g数量级。实时定量PCR可用于PCV2核酸定量检测，为该病毒体内外定量检测提供了一种技术手段。