miRNA表达载体的构建与抑制禽流感病毒(AIV)复制的研究

摘要

miRNA是一类内源性的长约21nt～25nt的短序列非编码单链RNA，可以通过部分互补或者完全互补结合到目的靶mRNA，以诱发蛋白质翻译抑制(翻译抑制子)或者介导目的mRNA的降解调节基因表达。根据这一特性，设计靶向禽流感病毒的miRNA编码序列，使之与靶mRNA完全互补。将其克隆到pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体中，构建单个或多个串联miRNA表达载体，分别为pcDNA6.2/NP、pcDNA6.2/PA、pcDNA6.2/PB2、pcDNA6.2/PA+NP和pcDNA6.2/PA+NP+PB2。鉴定正确后，将重组质粒转染MDCK细胞，禽流感病毒A/Goose/Guangdong1/96(H5N1)感染细胞。荧光显微镜判断转染效率，血凝(HA)试验和Real-time RTPCR检测抑制效果。荧光显微镜结果表明，重组质粒转染效率达60%；试验血凝(HA)试验结果表明，重组质粒均能抑制流感病毒的复制，以pcDNA6.2/PA+NP+PB2的抑制效果最佳，它们抑制流感病毒增殖的能力分别62.5%、50%、62.5%和75%、81%；Real-time RT-PCR结果表明，多个miRNA串联起来比单个miRNA有较高的抑制流感病毒复制的效果。