猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

摘要

应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段，并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF，编码由441个氨基酸残基组成的多肽，未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%；推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%。以阳性质粒为模板，用分别含有BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF，其PCR产物经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到pET-30a载体，构建的重组质粒命名为pET-30a-PN；将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，在IPTG诱导下进行表达；SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4ku的重组蛋白，重组蛋白以包涵体形式存在；薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%；Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应，说明该重组蛋白具有免疫学活性。