猪圆环病毒2型细胞培养适应毒株的培育与鉴定

摘要

从临床表现为断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)淋巴组织病料，经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪圆环病毒2型(PCV2)感染，用猪肾细胞系(PK15)分离培养,并连续传代，培育成一株细胞培养适应毒，命名为PCV2/LG株。分离毒株经细胞传25代后毒价显著提升，第35代毒价可达105.6TCID50/mL。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验(IPMA)、免疫电镜技术、分子克隆及核酸序列分析等鉴定表明：病毒感染细胞后抗原主要分布在细胞核及细胞质中；病毒感染的阳性细胞呈点式分布，阳性细胞数可达50%以上；免疫电镜观察到病毒免疫复合物呈实心小颗粒样粒子团，单粒子直径约为17nm；病毒基因组由1768核苷酸构成，与GenBank登录的8个PCV2基因组序列同源性达96.2%以上。用剂量为2mL的病毒细胞培养物，接种30日龄PCV2抗体阴性仔猪3头，可引起典型的PMWS临床症状。该研究结果为开展PCV2的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。