鸡传染性法氏囊病病毒Gt株vp5基因缺失株感染性克隆的构建

摘要

传染性法氏囊病病毒(IBDV)是双链RNA病毒，属于双RNA病毒科(Birnaviridae)禽双RNA病毒属(Avibirnavirus)，其基因组由A、B两个节段组成，编码4个结果VP1-VP4和非结构蛋白VP5。已有报道，VP5蛋白在病毒复制和体内外致病性中发挥重要作用，其分子机制至今不清楚。本研究利用体外定点突变法，缺失IBDVGt株vp5基因。在基因组两端分别引入锤头状核酶序列(HamRz)和丁肝病毒核酶序列(HdvRz)。将带有核酶序列的IBDV基因组插入载体pCAGG的β肌动蛋白启动子下游，构建了IBDV感染性克隆pCAGGmGtA△VP5HRT，该感染性克隆与pCAGGmGtBHRT共转染DFⅠ细胞。RT-PCR、间接免疫荧光、均显示拯救出了重组IBDV。IBDV非结构蛋白vp5基因缺失感染性克隆的成功构建为从分子水平上深入研究vp5基因功能奠定了基础。