日本血吸虫自杀性RNA颗粒抗原的制备及表达研究

摘要

目的制备日本血吸虫自杀性RNA颗粒抗原，并研究其在真核细胞内的表达，以期探讨新型抗原的研制方法，为制备抗血吸虫疫苗奠定基础。方法以SFV病毒为载体的疫苗是近年来发展起来的新型疫苗研究体系。该病毒为一种正链RNA病毒，在病毒的基因组中含有编码复制病毒RNA的高效RNA复制酶，在RNA复制酶的下游为编码病毒的结构蛋白质的两个开放读码框架(open readingframe,ORF)。本实验将编码日本血吸虫的三个抗原的mRNA置于RNA复制酶的序列的下游，通过RNA复制酶的作用高效表达抗原。另外在抗原基因的上游人工插入了-信号肽序列，在下游加入一个跨膜序列。 将编码日本血吸虫主要抗原GST(谷光甘肽转移酶)、sj23(日本血吸虫膜蛋白，分子量是23KD)及编码两种抗原的杂合基因(GST-sj23)分别克隆到自杀性RNA疫苗载体SFV3.spider(塞姆利基森林病毒载体)内，以体外转录法制备编码上述三种抗原的mRNA，即：SFV-GST mRNA,SFV-sjc23 mRNA及SFV-GST-sjc23 mRNA。同法合成编码SFV病毒表膜棘突蛋白质的help-S mRNA和SFV病毒表膜衣壳蛋白质的help-c的mRNA，然后将编码上述三种抗原的mRNA分别与编码病毒膜蛋白质的mRNA按比例混合即：一份抗原mRNA与一份编码SFV病毒表膜棘突蛋白质的mRNA(help-S)及一份编码SFV病毒表膜衣壳蛋白质的mRNA(help-C)混合。混合均匀后以电穿孔法导入BHK21细胞，制备含有日本血吸虫GST、sj23抗原及GST-sje23嵌合体抗原mRNA的假病毒颗粒。最后，对制备出的假病毒颗粒进行真核细胞感染实验，以间接免疫荧光法验证上述抗原的真核表达情况。结果三种RNA颗粒对BHK21细胞具有很好的感染性，所编码的蛋白质在BHK21细胞内能够高效表达，并且所表达的蛋白大部分被信号肽转运到细胞膜的表面。