朊病毒病实验动物脑组织PrPsc样本库的建立

摘要

朊病毒病是一类致死性神经退行性疾病，可在人及多种动物中发病，致死率达100％。利用Western blot技术检测脑组织中PrPsc是目前WHO和OIE推荐使用的动物和人朊病毒病确诊诊断技术，常规朊病毒病检测技术还有脑组织病理检测、免疫组化和免疫印记等，此外许多新型的检测技术也在不断地研发。在诊断技术的研发中，合格稳定的临床样本库对于诊断技术的考核十分重要。因此我们选用30只经颅内注射感染羊瘙痒因子263K的仓鼠，这些仓鼠在经过相似的潜伏期后全部出现朊病毒病的典型临床表现，并于终末期处死取脑组织，并以30只正常仓鼠作为对照，每只仓鼠脑组织分别制备10％、1％和0.5％3种浓度的匀浆，分装冷冻保存。以Western Blot方法确定脑组织匀浆中PrPsc的存在情况，并分别在建库半年和3年检测PrPsc的稳定性。经检测，30只感染仓鼠1 0%脑组织匀浆全部可检出PrPsc，1％脑组织匀浆有26份为Prpsc阳性，占总数的86.7％，另4份(13.3％)结果为阴性。30份O.5％的脑组织匀浆中19份显示Prpsc阳性，占总数的63.3％，另11份(36.7％)未检出PrPsc。半年及3年后复检，prpsc阳性检出率基本不变。所有正常仓鼠脑匀浆均为PrPsc阴性。由此我们建立了含有90份PrPsc阳性标本和90份PrPsc阴性样本的朊病毒病实验动物脑组织检测样本库，具有可靠的检测重复性，可满足动物和人朊病毒病诊断技术敏感新及特异性的评估和考核。