shRNA对大鼠脑胶质细胞IL-6表达抑制的体外及体内研究

摘要

目的：探讨RNA干扰对大鼠脑胶质细胞IL-6表达的体外抑制作用及其在大鼠创伤脑组织中IL-6表达的体内抑制作用和脑水肿的影响。rn 方法：运用软件设计并合成大鼠IL-6发夹RNA(small hairpin RNA，shRNA)的DNA模板，通过双酶切构建IL-6shRNA的pSUPER载体(pSUPER—IL-6)，经阳离子脂质体转染入大鼠胶质细胞瘤细胞系C6，在IFN—γ刺激下，培养上清ELISA法测定IL-6、IL-8水平，验证干扰效果并筛选最强的目的质粒进行体内实验。自由落体法建立大鼠脑创伤模型，随机分为治疗组、空质粒组、对照组各14只，在打击-24h、0h、+24h、+48h病灶内注射pSUPER—IL-6、空质粒或5μ1生理盐水，于打击+24h、+72h时处死大鼠，检测脑组织IL-6水平、含水量及含钠量，并在电镜下观察损伤脑组织的细胞结构变化。rn 结果：体外实验结果表明pSUPER—IL-6能有效转染入大鼠脑胶质瘤C6细胞系并抑制IL-6的表达，其中pSUPER—IL-6 1的RNA干扰效果最强，达66．6％，而对于IL-8的表达无影响。体内实验显示，干扰组脑组织IL-6水平略低于空质粒组与对照组，差异有统计学意义(P<0．05)，但组间脑组织含水量及含钠量差别无统计学意义，电镜下观察各组细胞结构无明显差异。rn 结论：RNA干扰手段可成功抑制大鼠脑胶质细胞体内及体外的IL-6表达水平，并具有基因特异性，而对于IL-6表达体内抑制方法的研究有待于进一步改进。