VASP下调及其对胃癌细胞BGC823迁移和侵袭能力的影响

摘要

目的：肿瘤转移是一个复杂的过程，肿瘤细胞自身的迁移能力与肿瘤的侵袭转移密切相关。由肌动蛋白调节蛋白所调控的肌动蛋白聚合/解聚的动态变化是决定肿瘤细胞迁移能力的关键环节。血管扩张刺激磷蛋白（vasodilator-stimulated phosphoprotein，VASP）作为一种肌动蛋白调节蛋白，能够调节细胞黏附和伸展过程中肌动蛋白的重排，在细胞迁移过程中起重要作用。前期我们采用免疫组化比较癌和癌旁组织VASP表达状况，结果显示VASP的表达水平随着肿瘤分化程度的降低呈逐渐升高的趋势，提示VASP 促进胃癌细胞转移的可能。为了探讨VASP对人胃癌细胞侵袭性的影响,我们通过pcDNA6.2-GW／EmGFP-miR 介导的外源性miRNA-VASP 下调胃癌细胞BGC823 VASP的表达，观察它对人胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。rn 方法：设计并合成4对靶向VASP mRNA的寡核苷酸片段，将其连接到 pcDNA6.2-GW／EmGFP-miR 载体，构建表达microRNA(miRNA)的真核载体s1、s2、s3、s4，脂质体转染法将重组质粒转入BGC823细胞。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)分析VASP mRNA抑制效率；Western blotting测定VASP 蛋白的表达量改变；二维划痕实验和三维细胞侵袭实验（Transwell migration assays）观察胃癌细胞迁移和侵袭能力的改变。rn 结果：转染48h 后，s3组VASPmRNA 较空转染组(Mock)和非特异序列组(Neg)明显减少，且少于其他组；72h后，s3组VASP蛋白表达明显少于其他组。在划痕实验和三维细胞侵袭实验中，转染s3 后BGC823 细胞组较其他组迁移速率明显减少，细胞侵袭能力明显降低。rn 结论：人胃癌细胞BGC823的VASP 表达可被质粒导入的外源性miRNA-VASP 有效抑制，进而降低其迁移和侵袭能力。