以MMPs酶切位点为连接臂构建Vasostatin和TRAIL的融合蛋白及其生物学活性分析

摘要

以MMPs酶切位点(PLGLWA)为连接臂,采用重组PCR技术获得Vasostatin(V)和TRAIL(T)的融合蛋白质编码序列,将该融合编码序列插入原核表达载体pMAL-c2中,重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,分别得到MBP-VT和MBP-TV融合蛋白,Amylose Resin亲和层析柱纯化.初步纯化的融合蛋白MBP-VT在体外内皮细胞增殖抑制实验、肿瘤细胞凋亡诱导实验中显示了明显的活性,而MBP-TV的作用不明显;体外酶实验和培养的肿瘤细胞上清酶切融合蛋白的免疫印迹分析结果表明融合蛋白MBP-VT皆能被正确酶切.上述结果表明成功融合表达了VT,该融合蛋白具有双重抗肿瘤活性,并可在肿痛高表达的MMPs作用下裂解为V和T。