微囊化肝细胞移植治疗暴发性肝衰竭大鼠的疗效观察

摘要

目的观察微囊化肝细胞移植对暴发性肝衰竭(Folminanthepaticfaihtre，FHF)大鼠的疗效。方法1.微囊化大鼠肝细胞的制备seglcn改良二步胰酶灌注法从SD大鼠肝脏进行肝细胞分离及纯化，所得肝细胞悬液在血细胞计数板上作细胞计数，用0．4％台盼蓝染色判断细胞产量及活率。肝细胞与2.0％海藻酸钠混匀，在自制装置下制备微囊化肝细胞并观察形态学特征。2．将雄性成年SD大鼠随机分为正常对照组和造模组。造模组大鼠腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GAIN)制备FHF模型，对照组注射同等体积的生理盐水。将FHF模型大鼠在造模后随机分成3组：I组为培养液组；Ⅱ组为裸肝细胞移植组，于造模后18h腹腔内植入游离同种异体肝细胞：Ⅲ组为微囊化肝细胞移植组，于造模后18h腹腔内植入微囊化同种异体肝细胞。3．分别在造模后的24h、48h、72h、120h、168h(1组尚需观察6h、12h)动态观察血清肝功能牛化指标丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase AST)、总胆红素(Totalbilirubin Tbil)的变化。结果1．每只大鼠分离纯化后所得肝细胞经0．4％台盼蓝染色判断细胞产量可达5×107以上，活率达90％以上.2．获取的肝细胞在含有多种辅助因子的RP1640培养基中与2.0％海藻酸钠等材料混匀，在自制装置下制备肝细胞微囊，经0．4％台盼蓝染色后85％以上肝细胞成活，微囊大小在400μm～800μm之间。3.肝衰竭模型建立后ALT、AST、Tbil迅速升高(P<0.05)，并于24h～72h达高峰。同一时间点两两比较发现，Ⅱ、Ⅲ组在48h、72h、120h均明显低于I组(P<0.05)，Ⅲ组在48h、72h均低于H组(P<0.05)。Ⅲ组峰值较I组前移。模型组、裸肝组和微囊组大鼠生存率分别是26．7％(4／15)、40.0％(6／15)、73．3％(11／15)，微囊组较模型组、裸肝组大鼠生存率有显著性提高(P<0.05)。结论1．腹腔注射D．GAIN1．4/kg一次性造模成功，大鼠状态、死亡率、肝脏组织学及牛化学改变符合FHF。2.Seglen改良二步胰酶灌注法对健康大鼠肝脏进行肝细胞分离及纯化，所得肝细胞产量及活率符合肝细胞移植(Hepatocytetransplantation，HCT)的要求。3．HCT能降低FHF大鼠 ALT、AST Tbil水平，减轻肝损伤程度，可能改善FHF预后。微囊化同种异体肝细胞移植对FHF大鼠的干预优于裸肝细胞。