考马斯亮蓝法对阿胶低肽含量测定的方法学研究

摘要

考马斯亮蓝G-250(Coomassie G-250)是一种甲基取代的三苯基甲烷，分子中磺酸基的蓝色染料，在465nm处有最大吸收值。考马斯亮监G-250能与蛋白质、多肽通过范德华力相互作用形成蛋白质(多肽)-考马斯亮蓝复合物蓝色溶液，引起该染料的最大吸收Zanax的位置发生红移，在595nm处有最大吸收值。由于蛋白质(多肽瞄马斯亮蓝复合物在595nm处的光吸收远高于考马斯亮蓝在465nm处的光吸收，因此，可大大地提高蛋白质、多肽的测定灵敏度。蛋白质(多肽).考马斯亮蓝复合物溶液颜色的深浅与蛋白质(多肽)的浓度成正比。本文论述了利用溶液颜色的差异进行比色测定，适合于蛋白质、多肽类的微量分析。而氨基酸则无类似反应。通过实验得出：由于考马斯亮蓝染色仅在lOmin内稳定，所以要求在实际操作时，最好在临加入比色皿之前加入亮蓝，这样可以避免由于时间因素导致的错误结果。考马斯亮蓝稀释液容易被光破坏，所以需要现用现配。