食管癌各证候磷脂酶结合蛋白及证候相应方剂对其作用的研究

摘要

目的：研究食管癌中医证候分子病机和证候相应方剂作用的分子机理。rn 方法：按照《中医内科学》噎膈病证候诊断标准对采集标本的食管癌病人证候分为痰气交阻证、瘀血内结证、津亏热结证、气虚阳微证；从外科切除的原发性食管癌组织和标本末端2个部位采集食管上皮细胞进行原代培养，加入通幽汤、启膈散、沙参麦冬汤和补气运脾汤的水提液处理48小时，用MTT法检测细胞的生长活性，用免疫共沉淀法和Western blot法检测磷脂酶结合蛋白、蛋白表达水平和酪氨酸磷酸化水平。rn 结果：启膈散、通幽汤和沙参麦冬汤对食管癌细胞生长有明显抑制作用，其作用大小依次为启膈散、通幽汤、沙参麦冬汤，补气运脾汤作用不明显；食管癌细胞中PLC-γ1、PLD1、EGFR超量表达、蛋白酪氨酸磷酸化增强；PLC-γ1与EGFR和PLD1直接结合，PLD1和PKCα直接结合，PLDl与Actin、PIP2直接结合；在痰气交阻证和血瘀证食管癌细胞中PLC-γ1和EGFR结合增加，在食管癌血瘀证细胞中PLC-γ1与EGFR和PLD1直接结合，在津亏热结证和气虚阳微证食管癌细胞中PLD1和PKCα结合增加，在痰气交阻细胞中PLC-γ1与EGFR和SOS1直接结合，PLD与Actin结合在各证型中并无明显差别；食管癌证相应方剂分别对相应证候食管癌细胞的增殖、磷脂酶与信号蛋白结合和PLC-γ1、PLD1、EGFR表达和磷酸化具有抑制作用。rn 结论：食管癌病变过程与磷脂酶和信号蛋白结合增强相关，食管癌不同证候的形成与磷脂酶结合不同信号蛋白而使其介导的信号传导增强相关，证候相应方剂通过抑制磷脂酶与信号蛋白结合从而抑制生长信号传导是其各自治疗食管癌的重要机制。