AnnexinⅠ和AnnexinⅡ在结直肠癌及其淋巴结转移灶内的表达

摘要

目的：结直肠癌引起的死亡位列癌症引起的死亡率的第4位，其发生、发展和转移的机理以及临床病理分级备受关注.有学者认为Annexin Ⅰ，Ⅱ与肿瘤的发生、发展和转移有关，可以作为提示预后的标志分子，本实验旨在研究Annexin Ⅰ和AnnexinⅡ的表达情况与结直肠癌的的病理分级和转移的关系。rn 方法：随机选取65例2008年长征医院结直肠腺癌癌组织存档蜡块。患者年龄在29～76岁之间，平均年龄为53岁。男性36例，女性29例，其中淋巴结转移37例。在65例结直肠腺癌中，有高分化腺癌18例，中分化腺癌33例，低分化腺癌14例，选取癌旁组织作为对照。所有病例无家族史且未经过放化疗。挑选了10例淋巴结取材比较完整的病例标本检测其淋巴结Annexin Ⅰ和Annexin Ⅱ的表达情况。染色步骤：石蜡切片68℃烤片60min，脱蜡水化后入3％过氧化氢灭活内源性过氧化酶10min，蒸馏水洗3×3min，切片入EDTA-Tris缓冲液(0.001mol/L，PH 9.0)高温高压修复抗原5min，自然冷却后，蒸馏水洗，PBS洗3×3min，分别滴加AnnexinⅠ和Annexin Ⅱ(1：100稀释)50ul置湿盒内于4℃过夜，PBS洗3×3min，MaxVisionTM室温20min，PBS洗3×3min，蒸馏水洗，DAB显色5min;苏木精浅染20秒，自来水洗返蓝，常规脱水、透明、中性树胶封片。PBS代替一抗作为阴性对照。rn 结果：rn 1.Annexin蛋白表达与结直肠癌病理特征的关系：在65例结直肠腺癌中Annexin Ⅰ阴性表达5例，弱阳性表达40例，中等阳性表达16例，强阳性表达4例；Annexin Ⅱ阴性表达14例，弱阳性表达27例，中等阳性表达18例，强阳性表达6例。高分化、中分化、低分化组间Annexin Ⅰ及AnnexinⅡ蛋白表达差异具有显著性(Hc=17.29，Hc=19.68，P＜0.005)。总体来观察，分化越高者Annexin Ⅰ和AnnexinⅡ的表达越弱，分化越差者表达越强。可作为阳性程度参照的是：Annexin Ⅰ在结肠腺体管腔内缘略强于胞浆，平均为弱阳性；浆细胞胞浆呈阳性表达。癌组织中阳性表达主要见于胞浆中，但分布不均，并随着肿瘤分化程度降低而上调，偶见个别癌细胞核表达阳性。AnnexinⅡ在结肠腺体上皮中的表达与Annexin Ⅰ类似；浆细胞的表达不均一，平均弱阳性；癌灶中AanexinⅡ阳性表达也与Annexin Ⅰ类似。rn 2.结直肠癌转移组中原发癌及其配对淋巴结转移癌中Annexin蛋白的表达：淋巴结转移组Annexin在原发灶中的表达强度较无淋巴结转移组稍强，可能是由于病例数据较少而且肿瘤分化程度偏差较大，统计学分析结果显示二组Annexin蛋白的表达相差不显著；比较淋巴结转移灶与相应的原发灶，可以发现AnnexinⅠ在转移灶中表达较原发灶有所增强(10例中有8例表达上调，P＜0.05).rn 结论：本试验中研究结果显示：Annexin Ⅰ、AnnexinⅡ表达在结直肠癌细胞胞浆中，随着肿瘤的分化程度降低其表达升高，说明其与肿瘤的发生发展的密切联系。结合文献，推测可能是因为AnxA1作为生长因子的底物，参与ERK信号传导通路的激活.而导致细胞的过度增殖、凋亡减少、分化障碍，从而出现形态学上的低分化状态，最终表现为低分化大肠癌的更明显的恶性生物学行为；但是这需要进一步的深入研究来予以证实。