骨髓间充质干细胞在早期重症急性胰腺炎并发多脏器功能障碍综合征中的作用

摘要

目的：探讨骨髓间充质干细胞在早期重症急性胰腺炎并发多脏器功能障碍综合征中的作用。rn 方法：将50只体重180～220 g Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠随机分为5组，每组10只。A组为正常对照组，不作任何处理;B组为L-精氨酸致早期重度胰腺炎(ESAP)模型组;C组为自体骨髓回输对照组，造模后1d用核染料Hoechst33258标记自体骨髓间充质干细胞(MSC)，并回输到自体骨髓腔，其余处理同B组;D组为异体骨髓移植组，在造模前3 d通过尾静脉移植雄性MSC;E组为粒细胞集落因子(G-CSF)预处理组(ESAP+GSF)，造模前3 d用核染料Hoechst33258标记自体骨髓间充质干细胞(MSC)，并回输到自体骨髓腔，在造模前3d，scG-CSF 40μg/(kg·d)，共3 d，其余处理同B组。复制SAP模型后72h处死大鼠，解剖，观察大体组织形态，包括胰腺及肝脏、肠道，一部分组织立即进行冰冻切片，荧光显微镜下观察组织中有否荧光标记的MSC出现。rn 选择有荧光的切片，进行相应组织的免疫荧光染色。对胰腺、肝脏切片进行CK19免疫荧光染色，以观察其是否分化为胰腺干细胞和肝脏干细胞。对肠道切片进行PanCytokeratin免疫荧光染色，以观察MSC是否分化为肠上皮细胞;另一部分组织常规石蜡包埋，切片后HE染色后，光镜下观察胰腺、肝脏、肠道组织学改变。记录造模后72 h内的死亡率。rn 结果：①72 h死亡率，A组为0，B组和C组为40％，C组和D组为10％。②病理损伤情况：大体观察：A组为正常的组织结构状态。B、C组在造模后72h胰腺坏死，胰周脂肪皂化，出现大量血性腹水，在死亡的大鼠中，可见肝脏、肠、肺等多脏器受累、坏死。D、E组大鼠肉眼可见腹水量明显减少，胰腺轻度水肿，无出血坏死灶。光镜观察：A组胰腺组织结构清晰，腺泡小叶完整，间质无渗出;B组、C组在造模后72 h。胰腺大片凝固性坏死，结构模糊，炎性细胞浸润;D、E组胰腺腺体小叶结构基本清晰，出血坏死减轻，间质中炎性细胞浸润较轻。A组肝脏小叶结构正常，B、C组肝细胞变性，灶状坏死，D、E组肝细胞轻度肿胀，少量炎性细胞浸润;A组大鼠肠黏膜腺体结构清楚，B、C组大鼠肠黏膜腺体紊乱，炎性细胞浸润，D、E组肠黏膜炎性细胞浸润明显减轻。③荧光染色情况：A、B组的胰腺、肝脏、肠道冰冻切片未见有黄绿色荧光;c组切片中偶见黄绿色荧光，但胰腺、肝脏切片未见CK19免疫荧光染色阳性细胞，肠道切片未见Pan Cytokeratin 免疫荧光染色阳性细胞;D组和E组切片黄绿色荧光多见，且胰腺、肝脏切片中可见CK19免疫荧光染色阳性细胞，肠道切片中可见Pan Cytokeratin免疫荧光染色阳性细胞。rn 结论：骨髓间充质干细胞参与早期重症急性胰腺炎并发肝脏、肠损伤时的病理修复，异体MSC移植和自体MSC动员对早期重症急性胰腺炎并发多脏器功能障碍综合征有保护作用。