基于量子点标记抗核抗体检测及在Hep-2细胞中的免疫荧光成像

摘要

目的：对基于量子点(QD655)标记抗核抗体(ANA)间接免疫荧光(IIFA)检测与细胞成像效果进行评价。rn 方法：以HEp-2细胞为实验基质片，CdSe/ZnS量子点标记二抗，采用IIFA对ANA进行检测，记录不同ANA阳性血清产生的免疫荧光模式，单特异性ANA同时用免疫印迹法确认，并与FTTC标记检测结果进行对比分析。rn 结果：QD655标记荧光优先与细胞浆内抗原-抗体反应，对间期细胞核仁、着丝点与核均质型的染色相对较弱，但在分裂期细胞中，与FTTC荧光标记所测核颗粒型与核均质型ANA结果趋近一致。在23例ANA阳性样本中QD标记共发现有15例呈现胞浆内红色颗粒荧光，其中12例被证实分别含有抗核糖体P蛋白、AMA-M2或抗Jo-1等自身抗体，另有3例胞浆呈阳性的靶抗原性质不明，而FTTC标记仅检测出9例呈现胞浆内颗粒绿色荧光。基于相同的实验条件，FTTC标记检出有10例呈明显核仁阳性，而QD标记仅检出5例，且仅有部分比例的细胞核仁呈阳性反应。将QD655与FTTC标记物联合应用，则因基质片细胞所处周期不同而致ANA阳性荧光掺入比例存在一定差异，使得细胞核荧光染色存在不均一性，分别见有不同程度的亮黄色、红黄色、黄绿色和绿色荧光染色。rn 结论：QD655标记ANA间接免疫荧光检测是可行的，并具有方法敏感和实验结果稳定的优点，与FTTC标记联合应用将有助于区分和展示不同细胞周期核内靶抗原分布及可结合抗原-抗体复合物量的差异，并可有效对ANA水平作出合理评估。