实验免RAPD反应体系的优化及引物筛选

摘要

目的：建立实验兔随机扩增多态DNA(RAPD)的最优反应体系，并对RAPD引物进行筛选优化。方法：以白毛黑眼(WHBE)兔，日本大耳白(JW)兔，新西兰(NZ)兔为实验材料，对影响RAPD反应的各因素进行优化，摸索出最佳的Mg2+，dNTP，Taq酶，引物和2DNA模板的浓度，并从60个随机引物中筛选出适合实验兔RAPD反应的引物。结果：最优的RAPD-PCR反应体系：在20μl的反应体系中，Mg2+1.5mM，dNTP0.25mM，Taq酶1.25U，引物5μM，模板DNA40ng。60个RAPD引物中剔除了重复性差，条带模糊的引物后，有25个引物稳定，扩增出来的条带清晰、多态性高。