重组蛹虫草Cu，Zn-SoD的抗氧化及脱辅基蛋白研究

摘要

超氧化物歧化酶(SOD)是一类重要的抗氧酶，是抵御活性氧(ROS )的基本防线之一，主要作用是催化超氧阴离子(O2·-)转化为分子氧(O2)和H2O2。根据其活力必需的辅助因子的金属离子种类，SOD分为Cu,Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD、Ni-SOD。含有金属辅基的酶失去了所拥有的金属离子就成为脱辅基蛋白(apo-protein)。Cu,Zn-SOD几乎广泛存在于真核生物的细胞质中，蛹虫草是一种昆虫寄生真菌，富含Cu,Zn-SOD。rn 本研究利用已构建重组蛹虫草超氧化物歧化酶工程菌进行了几项研究，主要目的:(一)考察外源cm-SOD基因的过表达是否能够对强氧化剂环境中的E. coli提供保护作用；(二)建立脱辅基的cm-SOD的制备方法及酶活力的再构建探索。rn 结论：外源cm-SOD基因在E.coli中的高效表达，提高了细胞中SOD的活力，减轻了菌体的代谢负担，降低了细胞中的02·-，促进了其对数前期的生长。重组E.coli在LB培养基中表达的cm-SOD蛋白多数以apo-cm-SOD的形式存在，经过DEAE-FF阴离子交换柱和CM-52阳离子交换柱纯化的apo-cm-SOD蛋白经SDS-PAGE电泳分析呈现均一条带，经活性电泳分析无活性。