甲基丙烯酸环氧丙酯致人支气管上皮细胞恶性转化不同时期METTL9/PAP1基因甲基化状态及其表达情况分析

摘要

目的：分析甲基丙烯酸环氧丙酯(Glycidyl Methacrylate,GMA)致人支气管上皮(16HBE)细胞恶性转化不同时期甲基转移酶样基因(Methyltransferase like9,METTL9;P53Activated Protein1,PAP1)甲基化状态及其表达情况,探讨其在GMA诱导16HBE细胞恶性转化过程中METTL9基因甲基化状态的改变及其意义.rn 方法：收获GMA染毒第10代(前期)、20代(中期)、30代(后期)16HBE细胞,应用甲基化芯片检测METTL9/PAP1基因在GMA诱导16HBE细胞恶性转化不同时期的甲基化状态,采用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence Quantitative PCR,qPCR)法检测该基因在恶性转化不同时期的表达量,并与同期DMSO溶剂对照组细胞比较.rn 结果：甲基化芯片结果显示,GMA染毒组16HBE细胞在第10、20代METTL9/PAP1基因均发生甲基化,对照组均未发生甲基化.qPCR结果显示,与同期溶剂对照组相比,GMA染毒组16HBE细胞在第10代METTL9/PAP1基因表达量均下调,在第20代上调;经甲基化转移酶抑制剂(5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-cdr))处理后,该基因与同代龄GMA组细胞相比,10代表达量水平上升(P＜0.01),20代表达水平下降,差异有统计学意义(P＜0.01).rn 结论：METTL9/PAP1基因可作为GMA诱导16HBE细胞发生恶性转化的一个特异分子标志.