羊传染性脓疱病毒长春分离株的分离鉴定及其B2L、F1L基因DNA疫苗表达载体的构建

摘要

通过病理组织学观察、免疫组化、间接免疫荧光(IFA)、病毒分离、电镜观察、PCR等方法对长春市某羊场3～6月龄羔羊出现“口疮”症状的病因进行研究分析,经系统鉴定后,证实该病毒株为羊传染性脓疱病毒(Orfvims,ORFV),命名为ORFV-jl。利用PCR方法克隆出其主要免疫原性基因B2L和F1L,之后将它们分别定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1的多克隆位点BamH Ⅰ和XhoⅠ之间,以及HindⅢ和EcoR Ⅰ之间,经PCR和酶切鉴定,构建出真核表达重组质粒pcDNA3.1-B2L和pcDNA3.1-F1L,之后通过脂质体介导法分别转染MDBK细胞,并用G418进行加压筛选,后经IFA和westem blot方法检测外源基因B2L、F1L的表达情况,结果得到预期大小的蛋白带,表明该重组质粒能够在哺乳动物细胞中较好地表达。